1. 用无菌稀释液如PBS缓冲液，生理盐水，将血样稀释2-4倍，适当增加血样稀释倍数，可有利 于提高单个核细胞纯度。

2. 在50mL 的锥底离心管中加入15-20mL 分离液，然后缓慢加入20-30mL 经稀释的全血或组织 细胞悬液至分离液液面之上。

3. 室温 700g-900g 离心 15-30 min，保证转子速度平稳下降。

4. 将离心管取出，缓慢吸去最上层，避免接触单个核细胞层。

5. 将单个核细胞层缓慢转移到另一 50mL 的锥底离心管中。

6. 加入无菌洗涤液（生理盐水，PBS 缓冲液等）并混匀后，室温下 300g 离心 10 分钟，小心弃掉 上清。

7. 为了去除残余血小板，可将细胞重悬于30-50mL 无菌洗涤液中，室温 200g离心10-15分，小 心弃掉上清。

8. 上步为选择性步骤，将会去除大部分血小板。

9. 将细胞用缓冲液或培养基重悬后进行检测，培养等后续操作。

注意事项：

1. 淋巴分离液使用时需保持室温状态；

2. 单个核细胞分离时离心转速应快升慢降，保证转子平稳下降。