为了 限度地减少交叉反应,山羊抗人 IgG 全抗体已与牛、小鼠和兔的血清蛋白交叉吸附。交叉吸附或预吸附是提高抗体特异性的纯化步骤,从而减少背景染色和交叉反应性。二抗溶液通过柱基质,该柱基质含有来自潜在交叉反应物种的固定化血清蛋白。只有非特异性结合的二抗被捕获在色谱柱中,高度特异性的二抗流过。进一步通过额外的色谱柱,产生高度交叉吸附的二抗制备物。这些额外步骤的好处在与其他一抗存在潜在交叉反应的多重/多色染色实验或可能存在内源性免疫球蛋白的组织/细胞荧光染色实验中显而易见。
使用偶联液:使用前将蛋白质偶联液在微量离心机中短暂离心;仅将上清液添加到实验中。此步骤将有助于消除储存过程中可能形成的任何蛋白质聚集体,从而减少非特异性背景染色。由于染色方案因应用而异,因此应根据经验确定抗体的适当稀释度。
特异性:该抗体与人 IgG 上的重链和所有人免疫球蛋白上的轻链结合。该抗体不结合非免疫球蛋白人血清蛋白或来自牛、小鼠和兔的血清蛋白/IgG。